在ELISA實驗中，研究人員需要進行多次加樣步驟完成實驗操作。對于常規(guī)雙抗體夾心法ELISA，一般有如下加樣步聚，即加樣本、加檢測抗體、加酶結合物、加底物（最后加終止液停止反應）。

加樣步驟基礎知識

加樣步驟中一般使用微量加樣器（移液器，移液槍），按照實驗規(guī)定的用量將液體成分加入酶標板孔板中。每次加入新的液體組分前，應更換新的吸頭，以免液體組分間發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。部分加樣步驟需使用稀釋后的液體組分，如標準品需要經(jīng)復溶倍比稀釋后上樣，抗體、濃縮酶結合物需稀釋為1×工作液，需要按照說明書的稀釋要求，預先在試管、EP管等中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。

加抗體、酶結合物工作液和底物工作液時，可用定量多道加液器，節(jié)省加樣的時間和操作，更好地保證孔與孔間的平行，減少因操作帶來的誤差。

在ELISA中，一般需進行45加樣。“45加樣"是什么？

45加樣，應當為45度加樣，即加樣槍的吸頭所在的直線應當與板條所在的直線呈45度角，吸頭貼著孔壁加入。

? 吸取樣品時，加樣槍吸頭不應黏附多余的液體；加樣時不可90度向孔中滴加液體，因為這樣操作會導致液體殘留在吸頭上，導致加樣不準確。

? 吸頭所在的直線與板條所在的直線所呈角度不可過小，會使液體殘留在酶標板孔的孔壁上，導致加樣不準確。

? 不要將吸頭伸入孔底，一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭，另一方面吸頭浸入液面下容易產(chǎn)生氣泡，導致加樣不準確。

以上為ELISA實驗中加樣tips的全部內容，您學會了嗎？

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