免疫組化(Immunohistochemistry,IHC)是一種利用抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記于抗體上的顯示劑顯色,從而在組織或細胞中確定抗原分布的技術。IHC廣泛應用于病理學、腫瘤學、神經科學等領域,以幫助識別特定蛋白質或其他分子在組織中的定位和表達水平。
一個典型的免疫組化試劑盒通常包括以下組件:
一抗:這是針對目標蛋白特別設計的抗體。一抗直接結合到組織樣本中目標抗原上。
二抗:連接在一抗上的抗體,通常標記有酶(如辣根過氧化物酶HRP或堿性磷酸酶AP),或者熒光素。二抗的作用是放大信號并允許可視化目標抗原的位置。
底物/染色液:用于與標記在一抗或二抗上的酶發生反應,產生顏色變化或熒光信號,從而顯示出目標抗原的位置。常用的底物包括DAB(對于HRP)和BCIP/NBT(對于AP)。
緩沖液和洗滌液:用于維持實驗過程中的pH值穩定,以及清洗未結合的抗體和其他試劑,減少背景噪音。
封閉液:用來阻斷非特異性結合位點,降低背景信號,提高信噪比。
復染劑:例如蘇木精,用于對細胞核進行染色,以便更清晰地觀察組織結構。
安裝介質和蓋玻片:最后步驟之一,保護樣本并提供一個適合長期保存的環境。
應用
免疫組化試劑盒被廣泛應用于研究和臨床診斷中,比如:
癌癥研究:檢測腫瘤標志物的存在和分布,有助于疾病的早期診斷、分類及預后評估。
神經科學:探索大腦及其他神經系統疾病中的蛋白質表達模式。
藥物開發:在藥物篩選過程中,用于評估藥物對特定生物標志物的影響。
選擇合適的免疫組化試劑盒時,需要考慮多個因素,包括目標抗原的特點、組織類型、所需的靈敏度和分辨率等。此外,隨著技術的進步,現在市場上也有更加自動化、操作簡便且結果重復性更高的新型免疫組化試劑盒可供選擇。